CLTCL1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401887-ACT

Il gene umano **CLTCL1** codifica la **catena pesante della clatrina‑like 1 (CHC22)**, una proteina di rivestimento della famiglia della clatrina che si assembla in reticoli per modellare le membrane e promuovere la formazione di vescicole nel traffico endocitico e post‑Golgi. **CLTCL1** è particolarmente coinvolto nello smistamento intracellulare regolato del carico, incluse le vie che controllano la sequestrazione e il riciclo di **GLUT4**, collegandolo all’omeostasi del glucosio e alle risposte allo stress metabolico. Coordinandosi con proteine adattatrici e con il macchinario del citoscheletro, **CLTCL1** influenza la selettività del carico, la maturazione delle vescicole e l’organizzazione spaziale dei compartimenti di traffico. La disregolazione del traffico mediato da clatrina e del riciclo del carico che coinvolge **CLTCL1** è stata associata a fenotipi metabolici ed è rilevante per studi sul trasporto responsivo all’insulina, sulla dinamica di membrana e sugli output di segnalazione cellulare.

CLTCL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLTCL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLTCL1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLTCL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLTCL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLTCL1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLTCL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLTCL1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLTCL1 nelle cellule tumorali con espressione di CLTCL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.