Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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CLK2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403326-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CLK2 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- CLK2 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal CLK2 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal CLK2 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di CLK2. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CLK2 Antibody (F-4): sc-393909
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CLK2 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-403326-ACT | 20 µg | $397.00 |
La CLK2 (CDC-like kinase 2) umana è una chinasi proteica a doppia specificità che fosforila fattori di splicing ricchi in SR e coordina la dinamica dello spliceosoma, collegando l’elaborazione del pre‑mRNA al controllo trascrizionale. L’attività di CLK2 contribuisce a programmi di splicing alternativo e si interseca con la regolazione del ciclo cellulare e con la segnalazione responsiva allo stress, incluse vie che influenzano il metabolismo dell’RNA e la proteostasi. Un’espressione o una segnalazione di CLK2 deregolate sono state associate a pattern di splicing alterati osservati in contesti di biologia del cancro e di malattie metaboliche, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici dell’elaborazione dell’RNA. In quanto chinasi regolatoria, CLK2 offre un punto di accesso maneggevole per analizzare come decisioni di splicing dipendenti dalla fosforilazione rimodellino le reti di espressione genica a valle.
CLK2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLK2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
CLK2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLK2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLK2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLK2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLK2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLK2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLK2 nelle cellule tumorali con espressione di CLK2 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.