Cks1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403019-NIC

Il gene umano CKS1B codifica Cks1, una subunità regolatoria conservata delle chinasi ciclina-dipendenti che collega i complessi CDK all’attività della ligasi E3 dell’ubiquitina SCF^SKP2 e promuove transizioni tempestive del ciclo cellulare. Facilitando l’ubiquitinazione e il turnover di inibitori delle CDK come p27^Kip1, Cks1 contribuisce a coordinare la progressione G1/S, la competenza per la replicazione del DNA e il recupero dai checkpoint in risposta a segnali proliferativi. Un’espressione deregolata di CKS1B è spesso associata ad alterazioni della proteostasi e a programmi di proliferazione aberranti, rendendolo rilevante negli studi sul controllo oncogenico del ciclo cellulare e sulla stabilità del genoma. Di conseguenza, Cks1 viene comunemente analizzato in vie che collegano la segnalazione delle CDK, la degradazione mediata dall’ubiquitina e le risposte allo stress replicativo.

Cks1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CKS1B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CKS1B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CKS1B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CKS1B interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.