choactase Plasmide Double Nickase (h): sc-401333-NIC

CHAT umano codifica la colina acetiltransferasi, l’enzima che catalizza la biosintesi dell’acetilcolina a partire da colina e acetil-CoA, sostenendo la neurotrasmissione colinergica nei sistemi nervosi centrale e periferico. L’attività di CHAT collega il metabolismo cellulare dell’acetil-CoA al caricamento delle vescicole sinaptiche e al rilascio regolato del neurotrasmettitore, influenzando l’eccitabilità neuronale e la segnalazione neuromuscolare. Alterazioni del tono colinergico e la disregolazione di CHAT sono state studiate nella neurodegenerazione, nel deterioramento cognitivo e nei disturbi dei motoneuroni e neuromuscolari, in cui la disponibilità di acetilcolina modella la funzione e la plasticità dei circuiti. Come marcatore dell’identità colinergica, CHAT è ampiamente utilizzato per analizzare programmi di differenziamento, fisiologia sinaptica e regolazione delle vie dei neurotrasmettitori.

choactase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHAT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHAT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHAT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHAT interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.