CHMP4B Plasmide Double Nickase (h): sc-401802-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CHMP4B Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CHMP4B Double Nickase Plasmid (h) e il CHMP4B Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CHMP4B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CHMP4B Plasmide Double Nickase (h) | sc-401802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHMP4B Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHMP4B (charged multivesicular body protein 4B) è un componente centrale del complesso ESCRT-III, che guida gli eventi di rimodellamento di membrana necessari per lo smistamento endosomiale e la biogenesi dei corpi multivescicolari. Polimerizzando sulle membrane e coordinandosi con l’attività ATPasica di VPS4, CHMP4B favorisce il sequestro del carico, la formazione di vescicole intraluminali e le fasi terminali dell’abscissione citocinetica, collegandosi così a vie che controllano la downregolazione dei recettori e la scissione di membrana. La funzione ESCRT dipendente da CHMP4B contribuisce anche alla riparazione della membrana plasmatica e ad aspetti dell’autofagia e dell’omeostasi lisosomiale attraverso il traffico endolisosomiale. Alterazioni genetiche dei componenti di ESCRT-III, incluso CHMP4B, sono associate a difetti nella divisione cellulare e nella proteostasi e sono state implicate in contesti di malattie neurodegenerative e oculari, nonché in una segnalazione alterata in reti endocitiche rilevanti per il cancro.
CHMP4B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHMP4B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHMP4B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHMP4B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHMP4B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.