CEPT1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430281-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CEPT1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CEPT1 Double Nickase Plasmid (m) e il CEPT1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cept1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CEPT1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430281-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CEPT1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430281-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Cept1** codifica la colina/etanolammina fosfotransferasi 1 (CEPT1), un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la fase finale della via di Kennedy, generando fosfatidilcolina e fosfatidiletanolammina a partire da CDP-colina o CDP-etanolammina e diacilglicerolo. Controllando i principali pool di glicerofosfolipidi, CEPT1 sostiene la biogenesi delle membrane, l’omeostasi degli organelli e i processi di segnalazione dipendenti dai lipidi che influenzano proliferazione, differenziamento e risposte cellulari allo stress. L’alterazione della sintesi e del rimodellamento dei fosfolipidi è ampiamente rilevante per la disfunzione metabolica, la neurobiologia e le transizioni oncogeniche dello stato cellulare, rendendo **Cept1** un nodo utile per indagare fenotipi guidati dai lipidi nelle cellule dei mammiferi. La funzione di CEPT1 è inoltre collegata a vie che regolano l’integrità del RE e la capacità secretoria, mettendo in relazione la disponibilità di lipidi con la proteostasi e il traffico di membrana.
CEPT1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cept1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cept1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cept1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cept1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.