Cdk4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400148-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdk4 Double Nickase Plasmid (h) e il Cdk4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDK4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk4 Antibody (DCS-35): sc-23896
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400148-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400148-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK4 codifica la chinasi ciclina‑dipendente 4 (Cdk4), un regolatore chiave della fase G1 che si associa alle cicline di tipo D per fosforilare le proteine della famiglia RB e promuovere la trascrizione dipendente da E2F necessaria per l’ingresso in fase S. Integrando i segnali mitogenici e i checkpoint del ciclo cellulare, Cdk4 contribuisce a coordinare la proliferazione, la senescenza cellulare e le risposte a segnali che inibiscono la crescita. Un’attività deregolata di CDK4 è spesso collegata a un controllo anomalo del ciclo cellulare nella biologia dei tumori, anche in contesti che coinvolgono l’amplificazione di CCND, l’alterazione della via di RB e una regolazione modificata di CDKN2A/p16. Di conseguenza, CDK4 è ampiamente studiato nelle vie che governano proliferazione, differenziamento e arresto della crescita indotto da stress.
Cdk4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.