CD81 Plasmide Double Nickase (h): sc-400185-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD81 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD81 Double Nickase Plasmid (h) e il CD81 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CD81. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD81 Antibody (B-11): sc-166029
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD81 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD81 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD81 è una tetraspanina umana (TAPA-1) che organizza microdomini arricchiti in tetraspanine sulla membrana plasmatica e coordina l’aggregazione dei recettori, l’adesione e la trasduzione del segnale. Attraverso interazioni con partner quali CD19/CD21 nelle cellule B e con integrine tra cui ITGA4/ITGB1, CD81 modula l’attivazione e la migrazione delle cellule immunitarie, oltre ai processi di traffico di membrana. Partecipa anche alla biologia delle vescicole e alla composizione degli esosomi, influenzando la comunicazione intercellulare e la presentazione dell’antigene. La deregolazione delle reti associate a CD81 è stata collegata a disfunzioni immunitarie e a una diversa suscettibilità all’ingresso di patogeni, rendendo CD81 un bersaglio utile per studiare l’organizzazione di membrana e le interazioni ospite–patogeno.
CD81 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD81 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD81. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD81. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD81 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.