CD5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402309-ACT

CD5 codifica una glicoproteina di superficie della famiglia dei recettori “scavenger” ricchi in cisteina, espressa principalmente sui linfociti T e su un sottogruppo di cellule B, dove funge da modulatore chiave della segnalazione del recettore dell’antigene. Associandosi al complesso del recettore delle cellule T e interagendo con ligandi come CD72, CD5 contribuisce a calibrare le soglie di attivazione, il flusso di calcio, la produzione di citochine e gli output di segnalazione a valle di MAPK e NF-κB che determinano l’omeostasi immunitaria. Un’espressione o una segnalazione alterata di CD5 è stata collegata a una disregolazione dell’attivazione e della differenziazione linfocitaria, con implicazioni per l’infiammazione autoimmune e per neoplasie ematologiche caratterizzate da fenotipi aberranti delle cellule B/T. In quanto biomarcatore e regolatore funzionale, CD5 è frequentemente utilizzato per studiare la dinamica della sinapsi immunologica, la tolleranza e i programmi di segnalazione specifici di linea.

CD5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD5 nelle cellule tumorali con espressione di CD5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.