CD5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402309-ACT

CD5 kodiert ein Oberflächen-Glykoprotein aus der „scavenger receptor cysteine-rich“(SRCR)-Familie, das vor allem auf T-Lymphozyten und einer Untergruppe von B-Zellen exprimiert wird und dort als zentraler Modulator der Antigenrezeptor-Signalübertragung fungiert. Durch die Assoziation mit dem T‑Zellrezeptor(TCR)-Komplex und die Bindung an Liganden wie CD72 hilft CD5, Aktivierungsschwellen, Calciumfluss, Zytokinproduktion sowie nachgeschaltete MAPK- und NF‑κB-Signalausgänge zu justieren, die die Immunhomöostase prägen. Eine veränderte CD5-Expression oder -Signalgebung wurde mit einer dysregulierten Aktivierung und Differenzierung von Lymphozyten in Verbindung gebracht, was für autoimmune Entzündungen und hämatologische Malignome mit aberranten B-/T‑Zell-Phänotypen relevant ist. Als Biomarker und funktioneller Regulator wird CD5 häufig genutzt, um die Dynamik der immunologischen Synapse, Toleranz und linienspezifische Signalprogramme zu untersuchen.

CD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.