CD37 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404423-ACT

La CD37 umana è una proteina di superficie cellulare della famiglia delle tetraspanine, arricchita sulle cellule B e su altri sottotipi di leucociti, dove organizza microdomini di membrana che coordinano l’aggregazione dei recettori e la trasduzione del segnale. Attraverso interazioni con proteine partner e con chinasi/fosfatasi associate, CD37 modula la segnalazione del recettore delle cellule B, l’adesione delle cellule immunitarie, la motilità e i programmi di attivazione guidati dall’antigene. CD37 contribuisce alla regolazione di segnali di sopravvivenza e differenziamento nei compartimenti linfoidi ed è spesso studiata nel contesto della biologia delle cellule B e dei meccanismi delle malattie ematologiche. La sua espressione e funzione sono inoltre rilevanti per le dinamiche del microambiente immunitario e per le vie di traffico dei leucociti.

CD37 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD37 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD37 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD37 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD37, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD37. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD37 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD37 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD37 nelle cellule tumorali con espressione di CD37 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.