CD2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419537-ACT

Il gene Cd2 del topo codifica per CD2, un recettore di adesione e costimolazione appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, espresso prevalentemente su cellule T e cellule NK. CD2 si lega a ligandi quali CD48 per stabilizzare la formazione della sinapsi immunologica, coordinare il rimodellamento del citoscheletro e amplificare la segnalazione a valle del recettore delle cellule T, contribuendo al flusso di Ca²⁺, all’attivazione delle MAPK e alla produzione di citochine. Grazie al suo ruolo nell’attivazione dei linfociti, nel traffico cellulare e nella comunicazione cellula‑cellula, CD2 è spesso studiato in vie che controllano la tolleranza immunitaria e le risposte infiammatorie, con rilevanza per modelli di malattia autoimmune, infezione e neoplasie ematologiche.

CD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cd2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cd2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cd2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cd2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD2 nelle cellule tumorali con espressione di Cd2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.