CD19 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400719-ACT

Il CD19 umano è una glicoproteina transmembrana a espressione ristretta alle cellule B che funge da corecettore all’interno del complesso del recettore delle cellule B (BCR), amplificando le soglie di segnalazione e modulando l’attivazione dipendente dall’antigene. Attraverso l’interazione con chinasi e proteine adattatrici, CD19 regola l’attività delle vie PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB, influenzando i programmi di proliferazione, sopravvivenza e differenziamento nelle cellule B in sviluppo e in quelle mature. Le sue dinamiche di espressione contribuiscono a definire l’identità di linea delle cellule B e a regolare le risposte immunitarie umorali, incluse le reazioni del centro germinativo e la produzione di immunoglobuline. Un’espressione o una segnalazione di CD19 deregolate sono state associate ad alterazioni dell’omeostasi delle cellule B e vengono spesso studiate nel contesto delle neoplasie delle cellule B e della disfunzione immunitaria.

CD19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD19 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD19 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD19, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD19. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD19 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD19 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD19 nelle cellule tumorali con espressione di CD19 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.