Plásmido CRISPR de Activación (h) CD19: sc-400719-ACT

El CD19 humano es una glicoproteína transmembrana restringida a las células B que funciona como correceptor dentro del complejo del receptor de células B (BCR), amplificando los umbrales de señalización y modulando la activación dependiente de antígeno. Mediante su acoplamiento a quinasas y proteínas adaptadoras, CD19 regula la actividad de las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK y NF-κB, influyendo en programas de proliferación, supervivencia y diferenciación en células B en desarrollo y maduras. La dinámica de su expresión ayuda a definir la identidad del linaje de células B y a regular las respuestas inmunitarias humorales, incluidas las reacciones del centro germinal y la producción de inmunoglobulinas. La desregulación de la expresión o la señalización de CD19 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis de las células B y se estudia con frecuencia en el contexto de neoplasias de células B y disfunción inmunitaria.

CD19 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD19 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD19 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD19 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD19, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD19. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD19 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD19 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD19 en células tumorales con expresión de CD19 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.