CD161 Plasmide Double Nickase (h): sc-405895-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD161 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD161 Double Nickase Plasmid (h) e il CD161 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KLRB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD161 Antibody (B199.2): sc-58963
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD161 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405895-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD161 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405895-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLRB1 codifica per CD161, un recettore di tipo lectina C espresso in modo prominente su sottopopolazioni di cellule natural killer e di cellule T, dove contribuisce a modulare le soglie di attivazione, la secrezione di citochine e le funzioni effettrici citotossiche. CD161 partecipa a circuiti immunoregolatori che governano la differenziazione dei linfociti e l’homing tissutale, influenzando programmi di segnalazione infiammatoria e la sorveglianza immunitaria. Alterazioni dell’espressione di KLRB1/CD161 e della frequenza di linfociti CD161+ sono state associate a disregolazione immunitaria nell’infiammazione cronica, nell’autoimmunità e nei microambienti immunitari tumorali. In quanto marcatore di superficie cellulare legato a stati funzionali dei linfociti, CD161 è spesso utilizzato nell’immunofenotipizzazione basata su citometria a flusso e in studi meccanicistici delle risposte delle cellule NK/T.
CD161 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLRB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLRB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLRB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLRB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.