CD16 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400544-ACT

FCGR3A codifica CD16 (FcγRIIIa), un recettore per la porzione Fc delle IgG a bassa–intermedia affinità, espresso in modo marcato sulle cellule natural killer e su sottopopolazioni di monociti/macrofagi. CD16 si associa a catene adattatrici contenenti ITAM (FCER1G e CD247) per avviare cascate di segnalazione che coinvolgono SYK, PI3K/AKT, PLCγ e MAPK, integrando la citotossicità cellulare anticorpo-dipendente (ADCC), la produzione di citochine e la gestione dei complessi immuni. Questo recettore partecipa all’attivazione dell’immunità innata, alla regolazione dell’infiammazione e al crosstalk con programmi interferon-dipendenti e NF-κB che modellano la funzione delle cellule effettrici. Alterazioni dell’attività di FCGR3A e della sua espressione sulla superficie cellulare sono state associate a risposte immunitarie disregolate in autoimmunità, infiammazione cronica, infezioni e immunologia dei tumori, a supporto di studi meccanicistici in modelli di cellule immunitarie umane.

CD16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FCGR3A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD16 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FCGR3A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FCGR3A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD16. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FCGR3A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD16 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD16 nelle cellule tumorali con espressione di FCGR3A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.