Plásmido CRISPR de Activación (h) CD154: sc-401682-ACT

CD40LG codifica CD154 (ligando de CD40), una proteína transmembrana de tipo II que se expresa de forma transitoria en la superficie de células T CD4+ activadas y otros subconjuntos inmunitarios, y que aporta señales coestimuladoras esenciales a células B, células dendríticas y macrófagos que expresan CD40. La interacción CD154–CD40 favorece la formación de centros germinales, la recombinación de cambio de clase de las inmunoglobulinas y la “licencia” de las células dendríticas, integrando la presentación de antígeno con la polarización de la respuesta adaptativa. La señalización aguas abajo implica la activación dependiente de TRAF de las vías NF-κB, MAPK y PI3K, que regulan la producción de citocinas, la supervivencia y la diferenciación. La actividad desregulada de CD40LG/CD154 se asocia con alteraciones de la inmunidad humoral y fenotipos inmunitarios inflamatorios, lo que respalda su relevancia en estudios sobre regulación inmunitaria y mecanismos vinculados a la autoinmunidad.

CD154 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD40LG sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD154 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD40LG en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD40LG, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD154. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD40LG y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD154 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD154 en células tumorales con expresión de CD40LG silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.