CD151 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401969-ACT

CD151 (tetraspanina-24) è una tetraspanina umana di membrana cellulare che organizza microdomini arricchiti in tetraspanine e modula il traffico e la segnalazione dei recettori partner, in particolare delle integrine leganti la laminina come ITGA3/ITGB1 e ITGA6/ITGB4. Attraverso questi complessi, CD151 influenza l’adesione cellula–cellula e cellula–matrice, il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione direzionale, con effetti su processi quali l’integrità epiteliale, le risposte angiogeniche e la motilità delle cellule immunitarie. La segnalazione associata a CD151 si interseca con la dinamica delle adesioni focali e con vie a valle legate alla regolazione dell’actina e al crosstalk tra recettori, plasmando il comportamento invasivo in molteplici contesti cellulari. Un’espressione deregolata di CD151 o un’alterata associazione tetraspanina–integrina è stata collegata, in sistemi sperimentali, a fenotipi rilevanti per la disseminazione delle cellule tumorali, la competenza metastatica e il rimodellamento vascolare.

CD151 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD151 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD151 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD151 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD151, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD151. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD151 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD151 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD151 nelle cellule tumorali con espressione di CD151 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.