CCP2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410133-LAC

AGBL2 umano codifica CCP2, una metallocarbossipeptidasi citosolica che catalizza la deglutamilazione di proteine poliglutamilate, inclusa la tubulina, modulando così la dinamica dei microtubuli e i processi associati di traffico intracellulare e mitosi. Invertendo i segni di glutamilazione apposti dagli enzimi tubulin tyrosine ligase–like, CCP2 contribuisce a regolare funzioni legate alle ciglia, il rimodellamento del citoscheletro e la precisione delle interazioni con le proteine motrici. Un’omeostasi alterata delle modificazioni post-traduzionali della tubulina è stata collegata a migrazione cellulare anomala, instabilità cromosomica e cambiamenti di segnalazione osservati in molteplici contesti patologici, supportando lo studio di AGBL2/CCP2 nella biologia del cancro e nelle vie del neurosviluppo. Queste caratteristiche rendono AGBL2 un nodo utile per indagare le vie associate ai microtubuli, la segnalazione ciliare e le reti di modificazioni post-traduzionali.

Le particelle di attivazione lentivirale CCP2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AGBL2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CCP2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AGBL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CCP2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AGBL2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.