CCDC23 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-415702-LAC

SVBP codifica la small vasohibin-binding protein, nota anche come CCDC23, che funge da cofattore essenziale delle proteine vasohibin e ne supporta l’attività di carbossipeptidasi della tubulina responsabile della detirosinazione dell’α-tubulina. Attraverso la regolazione delle modifiche post-traduzionali dei microtubuli, SVBP influenza la dinamica del citoscheletro, l’organizzazione del fuso mitotico, il traffico intracellulare e la migrazione cellulare. Un’alterata detirosinazione dei microtubuli è stata implicata in difetti della divisione cellulare e in fenotipi legati alla motilità, fornendo un collegamento meccanicistico con vie rilevanti per la biologia del cancro e per i processi di neurosviluppo. Di conseguenza, la modulazione dell’espressione di SVBP/CCDC23 è utile per studiare la segnalazione dipendente dai microtubuli, il trasporto degli organelli e il rimodellamento del citoscheletro nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CCDC23 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SVBP in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CCDC23 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SVBP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CCDC23. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SVBP e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.