Partículas Lentivirales de Activación (h) CBX4: sc-403903-LAC

CBX4 (chromobox 4) es una proteína del grupo Polycomb que funciona como lectora de cromatina a través de su cromodominio y contribuye a la represión transcripcional dentro del complejo represor Polycomb 1 (PRC1). También actúa como una ligasa E3 de SUMO, conectando la sumoilación con la regulación de las respuestas al daño del ADN, la progresión del ciclo celular y el mantenimiento de la identidad celular mediante el silenciamiento génico epigenético. CBX4 participa en la compactación de la cromatina y en la regulación génica a larga distancia, influyendo en vías que controlan la diferenciación, la senescencia y la señalización de estrés. La actividad desregulada de CBX4 y la represión dependiente de Polycomb alterada se han asociado con programas de proliferación aberrantes y estados transcripcionales oncogénicos en múltiples contextos tumorales, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del control epigenético.

Las partículas de activación lentiviral CBX4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CBX4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CBX4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CBX4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CBX4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CBX4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.