casein kinase Iα Plasmide Double Nickase (h): sc-400898-NIC

CSNK1A1 codifica la casein chinasi Iα umana, una chinasi serina/treonina che fosforila numerosi substrati per regolare la trasduzione del segnale e il turnover proteico. La casein chinasi Iα partecipa al controllo della via Wnt/β-catenina tramite la fosforilazione di componenti della via della β-catenina e contribuisce inoltre alla regolazione dei ritmi circadiani, alle risposte al danno del DNA e alle reti di fosforilazione associate al ciclo cellulare. Modulando la stabilità e la localizzazione, dipendenti dalla fosforilazione, di proteine chiave della segnalazione, CSNK1A1 influenza i programmi trascrizionali e l’omeostasi cellulare. La deregolazione dell’attività o dell’espressione di CSNK1A1 è stata collegata ad alterazioni della segnalazione Wnt e a perturbazioni più ampie dei programmi di proliferazione e differenziamento rilevanti per la biologia del cancro e per i processi di sviluppo.

casein kinase Iα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSNK1A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSNK1A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSNK1A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSNK1A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.