Plasmide CRISPR d'Activation (h) Calponin 2: sc-402882-ACT

Le gène humain **CNN2** code la **calponine 2**, une protéine régulatrice se liant à l’actine qui module l’organisation du cytosquelette, la contractilité actomyosine et la forme cellulaire. La calponine 2 s’associe aux fibres de stress et à des structures contractiles de type muscle lisse, influençant des processus tels que l’adhérence cellulaire, la migration et la mécanotransduction via la dynamique actine–myosine et des voies de signalisation liées aux GTPases Rho. En ajustant la tension cytosquelettique et les programmes de motilité, **CNN2** a été étudié dans des contextes incluant le comportement des cellules vasculaires et inflammatoires, le remodelage associé à la fibrose, ainsi que l’invasion et la métastase des cellules tumorales. Une expression ou une localisation altérée de la calponine 2 peut donc servir d’indicateur mécanistique de modifications des voies du cytosquelette ayant un impact sur le remodelage tissulaire et des phénotypes cellulaires liés aux maladies.

Calponin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CNN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calponin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CNN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CNN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calponin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CNN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calponin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calponin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de CNN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.