c-Kit Plasmide Double Nickase (h): sc-400106-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- c-Kit Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il c-Kit Double Nickase Plasmid (h) e il c-Kit Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KIT. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: c-Kit Antibody (E-3): sc-365504
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
c-Kit Plasmide Double Nickase (h) | sc-400106-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
c-Kit Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400106-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KIT codifica il recettore tirosin-chinasico c-Kit (CD117), recettore del fattore delle cellule staminali (SCF) che regola sopravvivenza, proliferazione, migrazione e impegno di linea nei progenitori ematopoietici, nei melanociti, nelle cellule germinali e nelle cellule interstiziali di Cajal. La dimerizzazione indotta dal ligando e l’autofosforilazione attivano le vie di segnalazione PI3K–AKT, RAS–MAPK, JAK–STAT e della famiglia SRC, coordinando la progressione del ciclo cellulare e i programmi di differenziamento. La deregolazione della segnalazione di KIT, incluse mutazioni attivanti o espressione aberrante, è implicata in processi oncogenici e associati ai mastociti, mentre varianti con perdita di funzione possono alterare l’ematopoiesi e la biologia della pigmentazione. Queste caratteristiche rendono c-Kit un nodo ampiamente utilizzato per studiare la segnalazione dei recettori tirosin-chinasici, le decisioni di destino cellulare e il cross-talk tra vie di segnalazione in modelli cellulari umani.
c-Kit Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KIT nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KIT. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KIT. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KIT interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.