BTN2A2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-433634-ACT

Mouse Btn2a2 codifica BTN2A2, una proteina di superficie immunoregolatoria della famiglia delle butirofiline che modula l’attivazione delle cellule T e la tolleranza periferica attraverso una segnalazione dipendente dal contatto con le cellule presentanti l’antigene. L’attività di BTN2A2 influenza la funzione della sinapsi immunologica, la produzione di citochine e la proliferazione dei linfociti, collegandola a vie che modellano le risposte immunitarie adattative nei tessuti linfoidi. Un’alterata espressione di BTN2A2 è stata studiata in contesti di infiammazione cronica e fenotipi simili all’autoimmunità, in cui variazioni nei segnali co-regolatori possono influenzare l’equilibrio tra cellule T effettrici e regolatorie. In quanto molecola associata ai checkpoint immunitari, BTN2A2 è rilevante anche nella ricerca di immunologia tumorale focalizzata sui meccanismi di evasione immunitaria e disfunzione delle cellule T.

BTN2A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Btn2a2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTN2A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Btn2a2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Btn2a2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTN2A2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Btn2a2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTN2A2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTN2A2 nelle cellule tumorali con espressione di Btn2a2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.