Plásmido CRISPR de Activación (m) BTN2A2: sc-433634-ACT

Mouse **Btn2a2** codifica **BTN2A2**, una proteína de superficie inmunorreguladora de la familia de las butirofilinas que modula la activación de las células T y la tolerancia periférica mediante señalización dependiente del contacto con células presentadoras de antígeno. La actividad de BTN2A2 influye en la función de la sinapsis inmunológica, la producción de citocinas y la proliferación de linfocitos, vinculándola a vías que moldean las respuestas inmunitarias adaptativas en tejidos linfoides. La alteración de la expresión de BTN2A2 se ha estudiado en contextos de inflamación crónica y fenotipos tipo autoinmune, donde los cambios en la señalización corre­guladora pueden afectar el equilibrio entre células T efectoras y reguladoras. Como molécula asociada a puntos de control inmunitario, BTN2A2 también es relevante para la investigación en inmunología tumoral centrada en mecanismos de evasión inmunitaria y disfunción de las células T.

BTN2A2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Btn2a2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BTN2A2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Btn2a2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Btn2a2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BTN2A2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Btn2a2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BTN2A2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BTN2A2 en células tumorales con expresión de Btn2a2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.