BRCA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400700-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRCA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- BRCA2 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal BRCA2 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal BRCA2 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di BRCA2. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BRCA2 Antibody (D-8): sc-518154
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRCA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-400700-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
BRCA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h2) | sc-400700-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Il gene umano BRCA2 codifica un oncosoppressore essenziale per la riparazione ad alta fedeltà delle rotture a doppio filamento del DNA tramite ricombinazione omologa, mediando il caricamento di RAD51 sul DNA resecato e stabilizzando le forcelle di replicazione durante la fase S. BRCA2 agisce all’interno della rete dell’anemia di Fanconi/BRCA per risolvere i crosslink interfilamento del DNA e coordinare la segnalazione dei checkpoint, preservando l’integrità del genoma. L’alterazione o la riduzione dell’attività di BRCA2 aumenta l’instabilità cromosomica ed eleva la suscettibilità alle neoplasie, rendendolo un gene centrale negli studi sulle risposte al danno del DNA. Lo stato di BRCA2 influenza inoltre la sensibilità cellulare allo stress replicativo e agli agenti genotossici, supportando ampie applicazioni nella ricerca sulla manutenzione del genoma e sulla biologia del cancro.
BRCA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BRCA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
BRCA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BRCA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BRCA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRCA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BRCA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRCA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRCA2 nelle cellule tumorali con espressione di BRCA2 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.