Blr1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402672-NIC

CXCR5 codifica il recettore per chemochine Blr1 (CD185), un GPCR a sette domini transmembrana che lega CXCL13 per guidare le cellule B e le cellule T helper follicolari nei follicoli delle cellule B e nei centri germinali. Il legame del ligando attiva la segnalazione mediata da proteine G eterotrimeriche con vie a valle PI3K–AKT, MAPK e flussi di calcio, che coordinano chemiotassi, dinamiche di adesione e organizzazione dei tessuti linfoidi. Il traffico e il posizionamento dipendenti da CXCR5 sono centrali per l’immunità umorale, la maturazione dell’affinità e la neogenesi linfoide, e le alterazioni della segnalazione CXCR5/BLR1 sono oggetto di studio nella disregolazione immunitaria e nelle neoplasie della linea B. Inoltre, l’espressione di CXCR5 sulle cellule T circolanti è ampiamente utilizzata per analizzare fenotipi simili ai T helper follicolari e il loro ruolo nell’infiammazione e nell’autoimmunità.

Blr1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CXCR5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CXCR5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CXCR5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CXCR5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.