BID Plasmide Double Nickase (m): sc-419329-NIC

Mouse Bid codifica BID, una proteina della famiglia BCL-2 di tipo BH3-only che collega la segnalazione estrinseca mediata dai recettori di morte alla via apoptotica mitocondriale. In seguito al clivaggio proteolitico nella forma tronca di BID (tBID), promuove la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna mediata da BAX/BAK, il rilascio del citocromo c e l’attivazione della cascata delle caspasi, integrando il dialogo tra apoptosi e risposte cellulari allo stress. L’attività di BID è associata alla regolazione dell’omeostasi immunitaria, della sopravvivenza degli epatociti e della segnalazione infiammatoria attraverso le vie TNF/Fas, e la sua deregolazione è implicata in meccanismi rilevanti per l’oncogenesi e per modelli di danno tissutale. In quanto regolatore nodale dell’apoptosi, BID è comunemente studiata in contesti quali la risposta al danno al DNA, la dinamica mitocondriale e le decisioni sul destino cellulare in condizioni di stress da citochine o genotossico.

BID Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Bid nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Bid. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Bid. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Bid interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.