Bad Plasmide Double Nickase (h): sc-400419-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Bad Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Bad Double Nickase Plasmid (h) e il Bad Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BAD. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Bad Antibody (C-7): sc-8044
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Bad Plasmide Double Nickase (h) | sc-400419-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bad Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400419-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BAD umano codifica Bad, un membro pro-apoptotico “BH3-only” della famiglia BCL-2 che integra segnali di sopravvivenza e di morte a livello della membrana mitocondriale esterna. Bad promuove l’apoptosi legandosi e neutralizzando proteine anti-apoptotiche come BCL-2 e BCL-XL, facilitando così la permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna dipendente da BAX/BAK e l’attivazione delle caspasi. La sua attività è strettamente regolata dalla fosforilazione a valle delle vie di segnalazione PI3K–AKT e MAPK, che può sequestrare Bad tramite le proteine 14-3-3 e spostare le cellule verso la sopravvivenza. Una segnalazione BAD deregolata è stata implicata in soglie apoptotiche alterate rilevanti per la biologia tumorale, la neurodegenerazione e le risposte allo stress, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo dei checkpoint mitocondriali.
Bad Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BAD nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BAD. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BAD. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BAD interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.