ATRX Plasmide Double Nickase (h): sc-400454-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATRX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATRX Double Nickase Plasmid (h) e il ATRX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATRX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATRX Antibody (D-5): sc-55584
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATRX Plasmide Double Nickase (h) | sc-400454-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATRX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400454-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATRX codifica un rimodellatore della cromatina ATP-dipendente di tipo SWI/SNF che, in collaborazione con DAXX, deposita la variante istonica H3.3 in regioni genomiche ripetitive, incluse i telomeri e l’eterocromatina pericentromerica. Attraverso la regolazione del posizionamento dei nucleosomi, della tempistica di replicazione del DNA e dei programmi trascrizionali, ATRX contribuisce a mantenere la stabilità del genoma e una corretta architettura della cromatina. L’alterazione della funzione di ATRX è associata a stati epigenetici modificati e a vie di mantenimento dei telomeri, ed è frequentemente studiata in contesti quali disturbi del neurosviluppo e tumori che presentano l’allungamento alternativo dei telomeri (ALT). In quanto fattore nucleare della cromatina, ATRX è comunemente oggetto di studio per i suoi ruoli nelle risposte al danno al DNA, nella tolleranza allo stress replicativo e nel controllo dell’espressione degli elementi ripetitivi.
ATRX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATRX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATRX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATRX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATRX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.