ASIC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401452-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASIC1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASIC1 Double Nickase Plasmid (h) e il ASIC1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ASIC1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASIC1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401452-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASIC1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401452-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ASIC1 umano (acid-sensing ion channel 1, ASIC1) codifica un canale ionico attivato dai protoni, permeabile al sodio, appartenente alla famiglia DEG/ENaC, che collega l’acidificazione extracellulare a una rapida depolarizzazione di membrana. L’attività di ASIC1 modella l’eccitabilità neuronale e la segnalazione sinaptica e può influenzare la dinamica del calcio intracellulare attraverso l’attivazione secondaria di canali voltaggio-dipendenti e la segnalazione a valle mediata da chinasi. Il canale partecipa a processi di rilevamento del pH associati all’acidosi legata all’ischemia, alla trasmissione nocicettiva e ai microambienti neuroinfiammatori. Una funzione o un’espressione disregolata di ASIC1 è stata studiata in contesti quali la suscettibilità all’ictus, gli stati di dolore cronico e i comportamenti correlati all’ansia, a supporto della sua utilità come bersaglio meccanicistico nella neurobiologia e nella ricerca sui canali ionici.
ASIC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASIC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASIC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASIC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASIC1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.