APOBEC3B Lentiviral Activation Particles (h): sc-401700-LAC

APOBEC3B (Apolipoprotein‑B‑mRNA‑Editing‑Enzym, katalytische Untereinheit 3B) ist eine Cytidin‑Deaminase, die in einzelsträngiger DNA Cytosin zu Uracil umwandelt und so zur angeborenen antiviralen Restriktion sowie zur Kontrolle endogener Retroelemente beiträgt. Seine Aktivität steht in Wechselwirkung mit DNA‑Replikations‑ und Reparaturprozessen, indem sie Läsionen erzeugt, die zu Mutationen weiterverarbeitet werden können, und dadurch die genomische Stabilität beeinflusst. Eine fehlregulierte APOBEC3B‑Expression wurde mit charakteristischen Mutationssignaturen in zahlreichen Krebsarten in Verbindung gebracht und wird im Kontext von Tumorentwicklung, DNA‑Schadensantworten und Replikationsstress untersucht. Als nukleäres Mitglied der APOBEC‑Familie wird APOBEC3B häufig eingesetzt, um Mechanismen der Mutagenese, Wirt‑Virus‑Interaktionen und Determinanten mutationsgetriebener Phänotypen in menschlichen Zellen zu erforschen.

APOBEC3B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente APOBEC3B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

APOBEC3B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der APOBEC3B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen APOBEC3B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen APOBEC3B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.