APOBEC3B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401700-LAC

APOBEC3B (subunità catalitica 3B dell’enzima di editing dell’mRNA dell’apolipoproteina B) è una deaminasi della citidina che converte la citosina in uracile nel DNA a singolo filamento, contribuendo alla restrizione antivirale innata e al controllo degli elementi retrotrasponibili endogeni. La sua attività si integra con i processi di replicazione e riparazione del DNA generando lesioni che possono essere elaborate in mutazioni, influenzando così la stabilità genomica. Un’espressione deregolata di APOBEC3B è stata collegata a caratteristiche firme mutazionali osservate in molteplici tipi di tumore ed è studiata nel contesto dell’evoluzione tumorale, delle risposte al danno del DNA e dello stress replicativo. In quanto membro nucleare della famiglia APOBEC, APOBEC3B è ampiamente utilizzata per indagare i meccanismi della mutagenesi, le interazioni ospite–virus e i determinanti di fenotipi guidati dalle mutazioni nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale APOBEC3B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APOBEC3B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale APOBEC3B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APOBEC3B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di APOBEC3B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APOBEC3B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.