ANO6 Plasmide Double Nickase (m): sc-430612-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ANO6 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ANO6 Double Nickase Plasmid (m) e il ANO6 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ano6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ANO6 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430612-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANO6 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430612-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Ano6** codifica **ANO6** (nota anche come **TMEM16F**), una scramblasi di fosfolipidi e un canale ionico attivati dal Ca2+ che regolano l’asimmetria lipidica della membrana plasmatica e l’esposizione della fosfatidilserina. L’attività di ANO6 integra la segnalazione del calcio intracellulare con processi di rimodellamento di membrana, inclusi cambiamenti di superficie legati alla coagulazione, lo shedding di vescicole e la morte cellulare regolata. In contesti immunitari ed ematopoietici, ANO6 influenza la funzione procoagulante delle piastrine e la dinamica di membrana di macrofagi o linfociti, collegandola a vie che controllano emostasi e infiammazione. La disregolazione dello scrambling dipendente da ANO6 è stata associata a fenotipi emorragici e a un’alterata clearance cellulare, rendendo **Ano6** un bersaglio utile per studiare l’omeostasi di membrana e le reti di segnalazione Ca2+-dipendenti in modelli murini.
ANO6 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ano6 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ano6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ano6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ano6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.