ANO1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401314-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ANO1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ANO1 Double Nickase Plasmid (h) e il ANO1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ANO1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ANO1 Antibody (C-5): sc-377115
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ANO1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANO1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANO1 (noto anche come TMEM16A) codifica un canale del cloruro attivato dal calcio che regola la secrezione di fluidi epiteliali, l’eccitabilità di membrana e il tono della muscolatura liscia, accoppiando i segnali intracellulari di Ca²⁺ al flusso di anioni. L’attività di ANO1 modella il trasporto transepiteliale, contribuisce alla segnalazione sensoriale e neuronale e si interseca con vie dipendenti dal calcio che influenzano la regolazione del volume cellulare e il potenziale di membrana. Alterazioni nell’espressione o nella funzione di ANO1 sono state associate a disturbi della secrezione epiteliale e della fisiologia delle vie aeree, ed è spesso studiato nel contesto della biologia dei tumori, dove il rimodellamento dei canali ionici può influenzare proliferazione, migrazione e microambiente tumorale. Queste caratteristiche rendono ANO1 un bersaglio utile per analizzare la segnalazione dipendente dai canali del cloruro e i processi fisiologici guidati dal calcio nelle cellule umane.
ANO1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ANO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ANO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ANO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ANO1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.