ALX3 Plasmide Double Nickase (m): sc-419094-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ALX3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ALX3 Double Nickase Plasmid (m) e il ALX3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Alx3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ALX3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419094-NIC | 20 µg | $410.00 |
ALX3 (aristaless-like homeobox 3) è un fattore di trascrizione homeobox di tipo paired che regola i programmi di patterning dello sviluppo nel complesso craniofacciale e negli arti, controllando reti trascrizionali che coordinano le decisioni di destino cellulare, la proliferazione e la morfogenesi. Nel topo, Alx3 contribuisce ai circuiti di regolazione genica che governano il mesenchima derivato dalla cresta neurale e la differenziazione dell’epidermide, interfacciandosi con vie di segnalazione dello sviluppo più ampie che plasmano la patterning antero-posteriore e dorso-ventrale. La disregolazione dei fattori di trascrizione della famiglia ALX è associata a malformazioni congenite delle strutture craniofacciali e degli arti, rendendo Alx3 un locus rilevante per lo studio delle relazioni genotipo–fenotipo in biologia dello sviluppo. La sua espressione strettamente controllata offre inoltre un modello per indagare come i fattori homeobox modulino lo stato della cromatina e la trascrizione specifica di linea.
ALX3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Alx3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Alx3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Alx3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Alx3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.