AHCYL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417109-LAC

AHCYL1 (adenosylhomocysteine hydrolase-like 1) codifica una proteina citosolica implicata nella segnalazione calcio-dipendente e nelle risposte allo stress cellulare, con ruoli riportati nella modulazione delle dinamiche di Ca²⁺ collegate al recettore dell’inositolo 1,4,5-trifosfato (IP3R) e dei programmi trascrizionali a valle. Attraverso effetti sulla mobilizzazione del Ca²⁺, AHCYL1 può influenzare vie che controllano apoptosi, proliferazione e differenziamento, incluse MAPK/ERK e altri nodi di segnalazione sensibili ai flussi intracellulari di calcio. Un’espressione deregolata di AHCYL1 o il suo contesto di segnalazione sono stati associati ad alterazioni della sopravvivenza cellulare e a fenotipi infiammatori in modelli rilevanti per la malattia, sostenendone lo studio in oncologia, neurobiologia e immunosegnalazione. In quanto gene umano, AHCYL1 viene spesso valutato per il suo contributo alla trascrizione dipendente dallo stimolo, all’integrazione dello stress mitocondriale e al crosstalk tra vie guidato dalla segnalazione mediata da secondi messaggeri.

Le particelle di attivazione lentivirale AHCYL1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AHCYL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale AHCYL1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AHCYL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di AHCYL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AHCYL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.