Agrin Plasmide Double Nickase (h): sc-401256-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Agrin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Agrin Double Nickase Plasmid (h) e il Agrin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AGRN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Agrin Antibody (D-2): sc-374117
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Agrin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401256-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Agrin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401256-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGRN codifica l’agrina, un grande proteoglicano a eparan solfato della matrice extracellulare che organizza le interazioni cellula–matrice e regola la formazione e la stabilità delle sinapsi. Nelle sinapsi neuromuscolari e centrali, la segnalazione mediata da agrina coordina l’aggregazione e il mantenimento delle specializzazioni postsinaptiche, sostenendo vie che controllano la localizzazione dei recettori, il rimodellamento del citoscheletro e l’organizzazione dei domini di membrana. Oltre alla sinaptogenesi, l’agrina contribuisce all’architettura della membrana basale, alla meccanotrasduzione e alla comunicazione tra neuroni e glia. Una deregolazione dell’espressione di AGRN o della processazione dell’agrina è stata associata ad alterazioni dell’integrità sinaptica e del rimodellamento tissutale in contesti neuromuscolari e neurodegenerativi, a sostegno del suo impiego come bersaglio in studi di genomica funzionale sulla connettività e sulla segnalazione della matrice extracellulare.
Agrin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AGRN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AGRN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AGRN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AGRN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.