ADH5 Plasmide Double Nickase (m): sc-419007-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADH5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADH5 Double Nickase Plasmid (m) e il ADH5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Adh5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADH5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419007-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADH5 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419007-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Adh5 codifica l’alcol deidrogenasi 5 (ADH5), una deidrogenasi citosolica ampiamente espressa che funziona come reduttasi della S-nitrosoglutatione (GSNOR) per regolare la bioattività dell’ossido nitrico (NO) metabolizzando la S-nitrosoglutatione e i relativi addotti derivati dalla formaldeide. Attraverso il controllo della S-nitrosilazione delle proteine e dell’equilibrio redox, ADH5 influenza le risposte allo stress ossidativo e nitrosativo, il metabolismo dipendente dal glutatione e le vie di segnalazione a valle che modulano la funzione mitocondriale e i programmi infiammatori. L’alterazione dell’attività di ADH5 è stata collegata a una capacità di detossificazione modificata e a una segnalazione del NO deregolata, con implicazioni per modelli di danno epatico, disfunzione immunitaria e processi neurodegenerativi in cui si accumulano specie reattive carboniliche e azotate. Adh5 rappresenta quindi un bersaglio maneggevole per studiare le reti di adattamento allo stress e la regolazione redox-sensibile dell’omeostasi cellulare nei sistemi murini.
ADH5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adh5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adh5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adh5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adh5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.