ADH1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402260-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADH1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADH1 Double Nickase Plasmid (h) e il ADH1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADH1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADH1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402260-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADH1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402260-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ADH1A umano codifica l’alcol deidrogenasi 1A (ADH1), un’ossidoreduttasi citosolica zinco‑dipendente che catalizza l’ossidazione dell’etanolo e di altri alcoli alifatici e aromatici a catena corta nei corrispondenti aldeidi, in modo dipendente da NAD⁺. Questa attività contribuisce al metabolismo epatico dell’alcol e dei retinoidi, influenzando l’equilibrio redox e il flusso dei metaboliti, con possibili effetti sulle risposte allo stress ossidativo e sui percorsi di gestione dei lipidi. Le variazioni o la disregolazione dell’attività dell’alcol deidrogenasi sono studiate nel contesto del danno tissutale correlato all’etanolo e di fenotipi metabolici, e l’espressione di ADH1A è spesso utilizzata come marcatore dello stato di differenziazione degli epatociti in sistemi sperimentali. ADH1A/ADH1 costituisce inoltre un nodo sperimentale maneggevole per analizzare la gestione delle aldeidi e la segnalazione a valle collegata a programmi cellulari di stress e infiammazione.
ADH1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADH1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADH1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADH1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADH1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.