ADAMTS-7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403381-ACT

ADAMTS7 codifica ADAMTS-7, una metalloproteinasi secreta zinco-dipendente della famiglia ADAMTS che rimodella la matrice extracellulare processando substrati proteoglicanici e regolando il turnover della matrice. Attraverso i suoi domini catalitici e accessori, ADAMTS-7 influenza le interazioni cellula–matrice, il rimodellamento tissutale e i programmi di segnalazione infiammatoria che determinano l’omeostasi dei tessuti vascolari e connettivi. Un’alterata espressione o attività di ADAMTS7 è stata collegata a vie rilevanti per la migrazione delle cellule muscolari lisce vascolari e per il rimodellamento della matrice extracellulare, implicandola in meccanismi associati all’aterosclerosi e alla suscettibilità alla malattia coronarica. ADAMTS-7 è pertanto ampiamente studiata in modelli di danno vascolare, rimodellamento di tipo fibrotico e cambiamenti della segnalazione guidati dalla matrice.

ADAMTS-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ADAMTS7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ADAMTS-7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ADAMTS7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ADAMTS7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ADAMTS-7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ADAMTS7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ADAMTS-7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ADAMTS-7 nelle cellule tumorali con espressione di ADAMTS7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.