53BP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400321-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 53BP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 53BP1 Double Nickase Plasmid (h) e il 53BP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira TP53BP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 53BP1 Antibody (E-10): sc-515841
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
53BP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400321-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
53BP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400321-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TP53BP1 codifica per 53BP1, un fattore della risposta al danno del DNA associato alla cromatina che si accumula in corrispondenza delle rotture a doppio filamento grazie al riconoscimento di marcatori istonici e alla cooperazione con sensori a monte come ATM. 53BP1 promuove il non-homologous end joining (NHEJ) e limita la resezione delle estremità del DNA, influenzando così la scelta della via di riparazione in opposizione alla ricombinazione omologa dipendente da BRCA1. Attraverso queste attività, sostiene la stabilità del genoma, la progressione della fase S e la segnalazione dei checkpoint; la sua disregolazione è implicata nel carico mutazionale e nelle riarrangiamenti cromosomici osservati in molteplici contesti oncologici. TP53BP1 è inoltre ampiamente utilizzato come readout funzionale per la formazione di foci di danno al DNA e per la competenza di riparazione in studi sullo stress replicativo e sulle risposte genotossiche.
53BP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TP53BP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TP53BP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TP53BP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TP53BP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.