δENaC Plasmide Double Nickase (h): sc-404577-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- δENaC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il δENaC Double Nickase Plasmid (h) e il δENaC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SCNN1D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
δENaC Plasmide Double Nickase (h) | sc-404577-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
δENaC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404577-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCNN1D codifica la subunità delta del canale epiteliale del sodio (δENaC), un canale del Na⁺ non dipendente dal voltaggio e sensibile all’amiloride, che contribuisce all’assorbimento transepiteliale di sodio e alla regolazione del potenziale di membrana. δENaC può assemblarsi con altre subunità di ENaC per influenzare il gating del canale e la selettività ionica, supportando l’omeostasi di elettroliti e fluidi nei tessuti epiteliali. L’attività di ENaC è regolata dal processamento proteolitico, dall’ubiquitinazione mediata da NEDD4L e da segnali che influenzano il traffico del canale e la probabilità di apertura, collegando SCNN1D alle vie che controllano il trasporto epiteliale. Un’alterata funzione di ENaC è implicata in disturbi dell’equilibrio di sali e fluidi ed è stata studiata nel contesto dell’idratazione della superficie delle vie aeree e di fenotipi correlati alla pressione arteriosa.
δENaC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SCNN1D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SCNN1D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SCNN1D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SCNN1D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.