Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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β-Amyloid Double Nickase Plasmid (h): sc-400520-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-Amyloid Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-Amyloid Double-Nickase-Plasmid (h) und β-Amyloid Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β-Amyloid: sc-517461
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-Amyloid Double Nickase Plasmid (h) | sc-400520-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-Amyloid Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400520-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APP kodiert das Amyloid-Vorläuferprotein, ein Typ-I-Transmembran-Glykoprotein, das in Neuronen und anderen Geweben weit verbreitet exprimiert wird und über regulierte sekretorische Transportwege prozessiert wird. Die sequenzielle Spaltung durch α-, β- und γ-Sekretasen erzeugt mehrere Peptide, darunter β-Amyloid, und verknüpft den APP-Stoffwechsel mit der endosomal-lysosomalen Funktion, synaptischer Aktivität und der Homöostase von Membranlipiden. β-Amyloid wird mit Proteinaggregation und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht, die mit neuroinflammatorischer Signalübertragung, oxidativen Schädigungswegen und veränderter neuronaler Konnektivität zusammenlaufen. Eine fehlregulierte APP-Prozessierung und die Anreicherung von β-Amyloid sind zentrale molekulare Merkmale, die in der Neurodegeneration und verwandten Proteostase-Erkrankungen untersucht werden.
β-Amyloid Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.