β-Amyloid Plasmide Double Nickase (h): sc-400520-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- β-Amyloid Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il β-Amyloid Double Nickase Plasmid (h) e il β-Amyloid Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira APP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: β-Amyloid Antibody (6C3): sc-517461
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
β-Amyloid Plasmide Double Nickase (h) | sc-400520-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-Amyloid Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400520-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APP codifica la proteina precursore dell’amiloide, una glicoproteina transmembrana di tipo I ampiamente espressa nei neuroni e in altri tessuti e processata tramite un traffico secretorio regolato. Il clivaggio sequenziale da parte delle secretasi α, β e γ genera molteplici peptidi, tra cui la β-amiloide, collegando il metabolismo di APP alla funzione endosomiale-lisosomiale, all’attività sinaptica e all’omeostasi dei lipidi di membrana. La β-amiloide è implicata nell’aggregazione proteica e nelle risposte di stress cellulare che si intrecciano con la segnalazione neuroinfiammatoria, con i percorsi di danno ossidativo e con alterazioni della connettività neuronale. Il processamento deregolato di APP e l’accumulo di β-amiloide costituiscono caratteristiche molecolari centrali studiate nella neurodegenerazione e nei disturbi correlati della proteostasi.
β-Amyloid Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.