ZPK Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404802-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ZPK Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- ZPK CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal ZPK CRISPR Activation Plasmid (h) e dal ZPK CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di MAP3K12. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ZPK Antibody (473CT23.12.5): sc-517378
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ZPK Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-404802-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il gene umano MAP3K12 codifica ZPK (noto anche come DLK), una MAP chinasi chinasi chinasi che agisce a monte delle cascate MAPK JNK e p38 per regolare programmi trascrizionali responsivi allo stress. ZPK integra segnali derivanti da lesione assonale, stimoli infiammatori e perturbazioni del citoscheletro, influenzando la differenziazione neuronale, la sopravvivenza e la degenerazione, con ruoli di primo piano nel sistema nervoso. Attraverso la fosforilazione delle MAP2K a valle, MAP3K12 contribuisce a controllare l’apoptosi, la crescita dei neuriti e il rimodellamento sinaptico. Una segnalazione di ZPK deregolata è stata associata alla neurodegenerazione e alla biologia del dolore neuropatico, rendendo MAP3K12 un nodo utile per analizzare la segnalazione da stress guidata da chinasi in modelli cellulari umani.
ZPK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP3K12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
ZPK Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP3K12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP3K12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZPK. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP3K12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZPK nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZPK nelle cellule tumorali con espressione di MAP3K12 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.