ZO-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401395

Panoramica

TJP2 codifica la proteina scaffold delle tight junction ZO-2, un membro della famiglia MAGUK che collega claudine e occludina al citoscheletro corticale di actina, sostenendo l’integrità della barriera epiteliale ed endoteliale. ZO-2 coordina inoltre l’assemblaggio delle giunzioni con vie di segnalazione che regolano polarità e proliferazione, incluse interazioni che influenzano la dinamica delle Rho GTPasi e programmi trascrizionali associati alle giunzioni. Grazie ai suoi ruoli nel controllo della permeabilità paracellulare e nel mantenimento dell’organizzazione apico-basale, un’alterata funzione di TJP2/ZO-2 è rilevante negli studi sulla disfunzione di barriera e sull’omeostasi tissutale. La disregolazione di componenti delle tight junction come ZO-2 è spesso indagata in contesti di infiammazione, fibrosi e trasformazione epiteliale, in cui sono evidenti il rimodellamento delle giunzioni e la perdita di polarità.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ZO-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TJP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TJP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TJP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ZO-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TJP2 per lo studio della segnalazione di ZO-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TJP2 critici per la funzione di ZO-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TJP2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ZO-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ZO-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TJP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ZO-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ZO-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TJP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TJP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.