ZO-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401395

Übersicht

TJP2 kodiert das Tight-Junction-Gerüstprotein ZO-2, ein Mitglied der MAGUK-Familie, das Claudine und Occludin mit dem kortikalen Aktin-Zytoskelett verbindet und so die Integrität epithelialer und endothelialer Barrieren unterstützt. ZO-2 koordiniert zudem den Zusammenbau von Zellkontakten mit Signalwegen, die Polarität und Proliferation regulieren, einschließlich Interaktionen, die die Dynamik von Rho-GTPasen und kontaktassoziierte Transkriptionsprogramme beeinflussen. Über seine Funktionen bei der Kontrolle der parazellulären Permeabilität und der Aufrechterhaltung der apiko-basalen Organisation ist eine veränderte TJP2/ZO-2-Funktion für Studien zu Barriere-Dysfunktion und Gewebehomöostase relevant. Eine Fehlregulation von Tight-Junction-Komponenten wie ZO-2 wird häufig in Kontexten von Entzündung, Fibrose und epithelialer Transformation untersucht, in denen Kontaktumbau und Polaritätsverlust ausgeprägt sind.

Das ZO-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TJP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TJP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TJP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZO-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TJP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZO-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TJP2-Exone abzielen, die für die ZO-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TJP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZO-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZO-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TJP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZO-2 HDR-Plasmid (h) und ZO-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TJP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TJP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.