Xanthine Oxidase Plasmide Double Nickase (h): sc-401185-NIC

XDH codifica la xantina ossidasi, un’ossidoreduttasi contenente molibdeno che catalizza le fasi terminali del catabolismo delle purine convertendo l’ipoxantina in xantina e la xantina in acido urico. Durante queste reazioni l’enzima può generare specie reattive dell’ossigeno, collegando l’attività di XDH all’omeostasi redox, alla segnalazione da stress ossidativo e alle risposte infiammatorie. La funzione della xantina ossidasi si intreccia con vie di adattamento metabolico e processi di danno tissutale in cui il turnover delle purine e la produzione di ossidanti sono aumentati. Un’espressione o un’attività di XDH deregolate sono state associate a fenomeni legati all’iperuricemia, a disfunzione endoteliale e a danno ossidativo in contesti di malattie cardiometaboliche e infiammatorie, supportandone l’impiego come bersaglio meccanicistico nella ricerca su metabolismo e risposte allo stress.

Xanthine Oxidase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus XDH nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di XDH. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di XDH. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con XDH interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.