WDR82 Plasmide Double Nickase (h): sc-406963-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- WDR82 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il WDR82 Double Nickase Plasmid (h) e il WDR82 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira WDR82. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: WDR82 Antibody (A-2): sc-518243
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
WDR82 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406963-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WDR82 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406963-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **WDR82** codifica una proteina contenente ripetizioni WD che funge da adattatore regolatorio in complessi nucleari che controllano la trascrizione e lo stato della cromatina. WDR82 è noto soprattutto per collegare lo stato di fosforilazione del dominio C-terminale dell’RNA polimerasi II al reclutamento di attività di modificazione degli istoni, inclusi i macchinari di metilazione di H3K4, influenzando così la regolazione genica a livello dei promotori. Attraverso questi ruoli, contribuisce all’elaborazione dell’RNA e alla fedeltà della trascrizione in vie che coordinano programmi di espressione genica nel contesto del ciclo cellulare e della differenziazione. La disregolazione del controllo della cromatina e della trascrizione associato a WDR82 è stata studiata nella biologia dei tumori e in altri disturbi legati a un’alterata regolazione epigenetica.
WDR82 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus WDR82 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di WDR82. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di WDR82. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con WDR82 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.