WDR7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404232-ACT

WDR7 (WD repeat domain 7) codifica una proteina scaffold con ripetizioni WD40, che si prevede medii l’assemblaggio di complessi multiproteici e coordini le interazioni proteina–proteina nel citoplasma. Sebbene i suoi ruoli meccanicistici restino definiti solo in parte, WDR7 è stata collegata alla regolazione della segnalazione intracellulare e a processi vescicolari/associati al trafficking che dipendono dalla formazione ordinata di complessi. Negli studi di genetica umana, WDR7 è stata associata a fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, a supporto di ulteriori indagini su come alterazioni del dosaggio di WDR7 perturbino le reti di segnalazione neuronale e l’omeostasi cellulare. Queste caratteristiche rendono WDR7 un bersaglio rilevante per la mappatura delle vie di segnalazione e la genomica funzionale in modelli cellulari pertinenti alla malattia.

WDR7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WDR7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WDR7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WDR7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WDR7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WDR7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WDR7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WDR7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WDR7 nelle cellule tumorali con espressione di WDR7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.