VpreB3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423685

Panoramica

Vpreb3 codifica VpreB3, una proteina correlata alla catena leggera surrogata che partecipa all’assemblaggio delle immunoglobuline e al controllo qualità durante lo sviluppo delle cellule B. Nelle cellule della linea B in via di sviluppo, VpreB3 è associata alla proteostasi del reticolo endoplasmatico e alla gestione dei componenti della catena leggera delle immunoglobuline, influenzando la maturazione del recettore pre‑B e la competenza della segnalazione a valle. Un’alterata regolazione di questa via può incidere sugli stati di differenziamento delle cellule B, sulla formazione del repertorio anticorpale e sulle risposte allo stress cellulare legate ai processi associati al RE. Queste caratteristiche rendono Vpreb3 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di maturazione delle cellule B e di biosintesi delle immunoglobuline in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VpreB3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Vpreb3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Vpreb3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Vpreb3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VpreB3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Vpreb3 per lo studio della segnalazione di VpreB3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Vpreb3 critici per la funzione di VpreB3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Vpreb3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VpreB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal VpreB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Vpreb3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VpreB3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR VpreB3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Vpreb3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Vpreb3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.