VLDLR Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401310-ACT

VLDLR (recettore delle lipoproteine a densità molto bassa) è un membro della famiglia dei recettori LDL che lega lipoproteine contenenti apolipoproteina E e la glicoproteina della matrice extracellulare reelin, collegando l’endocitosi alla trasduzione del segnale. Nella via di segnalazione della reelin, VLDLR agisce insieme alla fosforilazione di DAB1 per regolare la migrazione neuronale, l’organizzazione sinaptica e la formazione degli strati corticali. Al di fuori del sistema nervoso, VLDLR partecipa all’assorbimento dei lipidi e al traffico intracellulare, influenzando il metabolismo cellulare e l’omeostasi delle membrane. Un’espressione o una segnalazione di VLDLR deregolate sono state associate a fenotipi del neurosviluppo e ad alterazioni della gestione dei lipidi, rilevanti nei contesti di ricerca cardiometabolica e neurologica.

VLDLR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VLDLR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

VLDLR Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VLDLR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VLDLR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VLDLR. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VLDLR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VLDLR nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VLDLR nelle cellule tumorali con espressione di VLDLR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.