VIP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400776-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VIP Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- VIP CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal VIP CRISPR Activation Plasmid (h) e dal VIP CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di VIP. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VIP Antibody (H-6): sc-25347
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VIP Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-400776-ACT | 20 µg | $397.00 |
Il peptide intestinale vasoattivo (VIP) è un ormone neuropeptidico secreto che segnala principalmente attraverso i GPCR di classe B VPAC1 (VIPR1) e VPAC2 (VIPR2) per stimolare l’adenilato ciclasi, aumentare i livelli di cAMP e attivare programmi trascrizionali dipendenti da PKA. Nell’uomo, il VIP contribuisce alla comunicazione neuroendocrina, al rilassamento della muscolatura liscia, alla regolazione circadiana e neuroimmune e alla secrezione epiteliale, con effetti a valle sulla segnalazione MAPK e sulle reti citochiniche. L’attività della via del VIP è spesso studiata in contesti di infiammazione e polarizzazione delle cellule immunitarie, fisiologia delle vie aeree e del tratto gastrointestinale e neurobiologia, dove alterazioni della segnalazione del VIP sono state associate alla modulazione del microambiente tumorale e a stati neuroinfiammatori. Poiché il VIP viene rapidamente processato e agisce in modo paracrino/endocrino, una sua sovraregolazione controllata è utile per analizzare le dinamiche di segnalazione specifiche dei recettori e la biologia dei peptidi secreti.
VIP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VIP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
VIP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VIP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VIP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di VIP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VIP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da VIP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via VIP nelle cellule tumorali con espressione di VIP silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.