Vav2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401490

Panoramica

VAV2 codifica Vav2, un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) multidominio che attiva le GTPasi della famiglia Rho, come RAC1 e CDC42, a valle delle tirosin-chinasi recettoriali e della segnalazione mediata dalle integrine. Attraverso il suo core catalitico DH-PH e le interazioni mediate da SH2/SH3, Vav2 coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina, la formazione di ruffling di membrana e la dinamica delle adesioni focali che supportano migrazione e adesione cellulare. La segnalazione dipendente da Vav2 si interseca con vie che includono PI3K, MAPK e le reti di chinasi della famiglia Src, collegando segnali extracellulari a risposte trascrizionali e citoscheletriche. Un’attività o un’espressione deregolata di VAV2 è stata associata a un comportamento invasivo alterato e a un rimodellamento delle reti di segnalazione in molteplici contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici su motilità e trasduzione del segnale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Vav2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VAV2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VAV2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VAV2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Vav2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VAV2 per lo studio della segnalazione di Vav2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VAV2 critici per la funzione di Vav2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VAV2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Vav2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Vav2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VAV2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Vav2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Vav2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VAV2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VAV2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.